### 人结肠腺癌细胞LS1034培养指南

细胞培养条件

细胞名称：人结肠腺癌细胞LS1034

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：推荐第一次以1:2的比例进行传代。

备注：用无菌离心管收集培养基样品，以备与其他实验条件进行比较。如果对比实验效果不佳，推荐直接购买尊龙凯时的完全培养基。

细胞处理

收到细胞后，待细胞状态良好时，使用完全培养液灌满瓶子并封好瓶口，这样能确保细胞运输的最佳效果。首先，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱静置3-4小时，以稳定细胞状态。随后，通过显微镜观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片进行保存（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，如果未提供照片，默认收到细胞状态良好。

在传代后，建议将一瓶用原瓶的完全培养基，另一瓶用自己配制的完全培养基，以便进行对比培养。在换液时，将瓶盖稍微拧松。

细胞培养步骤

a. 细胞传代：如果细胞的汇合度未超过80%，将瓶内的完全培养液收集至离心管中，并留5ml培养基，放入37℃、5% CO2培养箱中。如细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱消化1-2分钟，并在显微镜下观察。如细胞大多数变圆并脱落，迅速返回操作台，轻轻敲打培养瓶后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 根据1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，再放置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存：当细胞覆盖培养瓶时80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打以脱落，转移悬液至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；弃上清后，沉淀细胞加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。最后，将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐中，则须在-80℃冰箱中存放24小时后方可转移。

c. 细胞复苏：从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻，直到冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。接着，将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；弃去上清，再用5ml完全培养基重悬并接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

注意事项：有些细胞在运输过程中的粘附能力较弱，可能导致细胞脱落，这是正常现象。如脱落较多，可以将培养瓶内的培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养（后期可对比实验），沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打，重悬后消化1-2分钟，加入5ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清后，补加1-2ml完全培养基重悬，并按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

售后条款：若细胞出现问题，以下情况可重发及判定标准：

1. 运输过程中遇到的问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，均可申请重发。
2. 如发生细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后将重发。
3. 常温发货的细胞静置24小时后，及干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，如果大部分细胞未存活（须提供清晰的细胞状态照片），可申请重发。
4. 此外，若明确细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，并使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后予以重发。
5. 收到细胞当天及第二、三天内拍照记录，如超过三天未告知，视为产品合格。
6. 如在4-7天内出现问题，需提供收到细胞前三天的照片及细胞操作的详细步骤，经过技术人员判断结果后，若判定为我方责任则将重发。

若因客户原因导致的细胞污染、操作不当、非推荐培养体系等问题，我司将不予重发。具体情况将根据实际情况而定。