尊龙凯时提供的人胃癌细胞MGC803培养指导，确保用户能有效地进行细胞培养。本文将详细介绍细胞培养的各个方面，包括培养条件、细胞处理步骤及注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：人胃癌细胞MGC803

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P

传代方法：首次传代建议比例为1:2

传代情况：每两天更换培养基

备注：请使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养，如效果不佳，建议使用尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，待细胞状态良好后，用完全培养液灌满细胞瓶并封好瓶口。这是运输细胞的最佳措施。对于收到的细胞，请用75%酒精消毒整个细胞瓶，然后在超净台下进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后，再进行后续操作。显微镜下观察细胞生长情况并保存不同倍数的照片（最好各拍摄40x, 100x, 200x），前三天的照片将作为售后依据，未提供照片则默认为收到状态良好。建议在传代后一个瓶使用原培养基，另一个瓶使用自己配置的完全培养基，以便进行对比，换液后松开瓶盖以保持气体交换。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管中，保留5ml以供培养；如超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟后，观察细胞情况，若大部分细胞变圆并脱落，迅速轻拍培养瓶并加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻吹使细胞完全脱落后吸出，转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 根据1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，倒置培养瓶观察，待细胞回缩变圆后，立即加入5ml完全培养基终止消化。
3. 将悬液转移至15ml离心管，1000rpm离心5分钟，弃去上清，沉淀细胞加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 直接将冻存细胞放入-80℃冰箱，后期如需转入液氮罐，需在-80℃保存24小时后转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴解冻，直至冻存管中无结晶，再用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，使用5ml完全培养基重新悬浮后接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中。
4. 次日，更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在细胞运输过程中，部分细胞可能会脱落，这是正常现象。若脱落较多，可收集上部培养液至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清进行对比培养。沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打并进行消化，终止后用完全培养基重新悬浮，再按1:2比例传代至两个T25瓶，补充新的完全培养基并放入37℃，5% CO2培养箱中。

五、售后条款

1. 若细胞出现问题，重发的条件包括：运输途中细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等；细胞污染需在48小时内提供真实实验结果；常温发货细胞静置24小时后或干冰发货细胞未存活等。所有情况需提供清晰的细胞状态照片。
2. 不予重发的情况包括：客户造成的细胞污染、错误操作导致细胞状态不佳、使用非推荐培养体系等。

通过遵循上述指导，您将在使用尊龙凯时的人胃癌细胞MGC803时获得最佳效果。如有任何疑问，也请及时联系我们以获取专业支持。