尊龙凯时超氧化物歧化酶（SOD）活性检测实验方案

在生物医学研究中，选择合适的试剂和控制变量是确保实验结果可靠性的关键。以下介绍了一种基于黄嘌呤氧化酶的酶活性检测方法，以尊龙凯时品牌为例，强调其在该领域的应用。

试剂准备

试剂样本孔：40µL；样本对照孔：40µL；空白孔：20µL；空白对照孔：20µL。根据实验需要，准备如下反应体系：工作黄嘌呤氧化酶40µL、样本稀释液40µL、工作试剂各孔添加164µL。

实验步骤

充分混匀混合液后，在37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）下孵育30分钟。之后，在波长450nm下测定各孔的吸光值A。根据下列公式计算ΔA值：ΔA样本 = A样本 - A样本对照，ΔA空白 = A空白 - A空白对照。注意：空白孔和空白对照孔可以选择设置2-3孔，对于不同背景颜色的样本，可以设置对应的对照孔以消除背景干扰。

抑制百分比计算

抑制百分率的计算公式为：(ΔA空白 - ΔA样本) ÷ ΔA空白 × 100%。建议将样本的抑制百分率控制在10%-90%之间。如果结果超出此范围，则需要调整样本量进行重新检测。如果抑制百分率偏高，应用样本稀释液适当稀释；反之，则需准备浓度更加合适的样本。

SOD酶活性单位

在上述黄嘌呤氧化酶偶联反应体系中，若抑制百分率为50%，则该反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位(U/mL)。

SOD酶活性计算

对于血清（浆）样本的SOD活力计算如下：

SOD活性(U/mL) = [抑制百分率 ÷ (1 - 抑制百分率) × V反总] ÷ (V样 × n) = 112 × 抑制百分率 ÷ (1 - 抑制百分率) × n。

对于组织和细胞样本，可通过以下方式计算SOD活性：

按样本蛋白浓度计算：SOD活性(U/mg prot) = [抑制百分率 ÷ (1 - 抑制百分率) × V反总] ÷ (V样 × Cpr) × n。
按样本鲜重计算：SOD活性(U/g鲜重) = [抑制百分率 ÷ (1 - 抑制百分率) × V反总] ÷ (W × V样 ÷ V样总) × n。
按细胞数量计算：SOD活性(U/10^4 cells) = [抑制百分率 ÷ (1 - 抑制百分率) × V反总] ÷ (500 × V样 ÷ V样总) × n。

其中，V反总为反应体系总体积，W为样本质量，V样为添加至反应体系中的样本体积，V样总为加入1×Lysis Buffer的总体积，n为样本稀释倍数，Cpr为样本蛋白浓度，500代表细胞总数（500万）。